Энтерококк, enterococcus (faecalis, faecium, spp) свойства, диагностика, лечение 1

Anaerococcus spp

О патогенности энтерококков впервые упоминается в конце XIX в.: MacCallum и Hastings выделили этот микроорганизм из биоматериала больного острым эндокардитом и дали название Micrococcus zymogenes на основании его ферментативных свойств. Микроорганизм был устойчив к нагреванию до 60 °С, а также к различным антисептикам, включая карболовую кислоту и хлороформ. Также было установлено, что при внутрибрюшинном введении белым мышам этот микроб вызывал летальный исход, в экспериментальных условиях Micrococcus zymogenes был причиной эндокардита.

Спустя столетие энтерококки приобрели существенное значение и заняли 2-е место после Е. coli, составив более 12% всех возбудителей нозокомиальных инфекций (НКИ). В последние го/ты, по данным зарубежных авторов, энтерококки как причина НКИ в клиниках интенсивной терапии занимают 3-е место. Энтерококки по антигенному строению (группоспецифическая тейхоевая кислота) отнесены R. Lancefield в начале 1930-х годов к стрептококкам группы D. Четкие отличия энтерококков от стрептококков по ряду признаков указывают на необходимость выделить энтерококки в самостоятельный род.

Это было подтверждено в 1984 г. в сравнительных исследованиях по гибридизации нуклеиновых кислот, а также анализом иммунотипировапия белкового комплекса энтерококков, в котором не обнаружено родства со стрептококками других серологических групп.

В настоящее время Enterococcus spp. разделяют на пять групп:
Группа I — Е. avium, E. gilvus E. malodoralus, Е. pollens, E.pseudoaxnum, Е. raffinosus, E.saccharolyticus.
Группа II — E.faecalis, E.faecium, Lactococcus spp., E. casseliflavus, E.galUnarum, E. mandtii.
Группа III — E. dispar, E. durans, E. hirae, E. porcinus, E. ratli.
Группа IV — E. asini, E. cecorum, E. sulfureus. Группа V E. columbae, Vagococcus spp.

Энтерококки окрашиваются по Граму положительно, представляют собой кокки, факультативные анаэробы. Enterococcus spp. это часть нормальной микрофлоры слизистых оболочек ЖКТ и половых путей женщин. Некоторые особенности этого микроорганизма обеспечивают ему длительное выживание в условиях окружающей среды. Энтерококки способны активно приспосабливаться к различным неблагоприятным факторам, передаваться в условиях стационара от человека к человеку через руки, инструменты. В литературе описаны случаи, когда источником НКИ оказались мобильные телефоны, стетоскопы, термометры и прочие объекты нозокомиальной среды.

Enterococcus spp. сохраняют жизнеспособность в течение не менее педели на различных поверхностях окружающей среды: на продуктах (например, па сыре — 180 дней), в почве — до 77 дней, на загрязненной одежде до 90 дней; при температуре -70 °С чистая культура энтерококка выживает в течение нескольких лет, на поверхности агара при +4°С — нескольких месяцев. Энтерококки утрачивают жизнеспособность при автоклавировании при температуре 121 С через 15 мин, при обработке сухим жаром при 160 -170 °С — через час. Эффективные дезинфектанты — 1% гипохлорит, формальдегид, 70% этиловый спирт, 2% глутаральдегид, препараты йода.

Энтерококки способны вызывать у человека гнойно-воспалительные процессы различной локализации, которые протекают обычно вяло, хронически. Инфекции человека в основном обусловлены двумя видами энтерококков: E.faecalis (80-90%) и E.faecium (5-15%). Другие виды выделяют из различных патологических биоматериалов значительно реже. В основном сообщения об инфекционных осложнениях энтерококковой природы касаются следующих видов: Е. durans, E. avium, casseliflavus, E. gallinarum, Е. raffinosus и Е. hirae. Основным местом обитания Е. faecalis служит кишечник человека, E.faecium — кишечник свиней. Распространенность энтерококков в окружающей среде объясняется также их природной устойчивостью к различным классам антимикробных препаратов, включая амипогдикозиды, b-лактамы и хинолоны.

Например, резистентность энтерококков к аминогликозидам есть следствие их способности блокировать проникновение препаратов через клеточную стенку. Впрочем, применение аминогликозидов возможно, но в комбинации с препаратами, способными проникать через клеточную стенку микроорганизмов. Следует заметить, что в настоящее время отмечается быстрое распространение штаммов энтерококков с высоким уровнем устойчивости к аминогликозпдам (> 1000 мкг/мл для стрептомицина и >500 мкг/мл для гентамицина), по пока это явление не до конца изучено.

Колонизация слизистых оболочек основное условие развития энтерококковой инфекции. Энтерококки, как уже отмечалось, колонизируют слизистую оболочку ЖКТ у здоровых людей, входя в состав микрофлоры фекалий (103—108 колониеобразующих единиц [КОЕ] в 1 г). Между энтерококками и эпителиальными клетками организма хозяина существует тесная связь, которая препятствует выведению их вследствие естественной подвижности кишечника. Большинство известных микроорганизмов растет в узком диапазоне значений pH, близких к нейтральному. Энтерококки должны преодолеть кислую среду желудка, чтобы попасть в нижние отделы кишечника, что возможно благодаря устойчивости этих микробов к низким значениям pH среды их обитания (pH 3,2-4,8 в течение 15-30 мин).

Читайте также:  Последние новости о лечении ВИЧ в 2020 году Gepatit ABC

Прикрепленные бактерии гораздо легче, чем свободноплавающие, образуют кооперативные структуры с другими бактериями. Это особенно важно для развития синтрофной кооперации (вариант кооперации, при которой оба партнера полностью зависят друг от друга в своей жизнедеятельности). В прикрепленных бактериальных сообществах имеются более существенные возможности обмена плазмидами или эписомами. Плазмиды — это специальные внехромосомные генетические элементы, ответственные за внехромосомную передачу резистентности к одному или нескольким антимикробным препаратам. Энтерококки способны прикрепляться к эпителиальным клеткам различных отделов тонкой и толстой кишки, а затем проникать из просвета тонкой кишки через мезентериальные лимфоузлы в печень, селезенку.

Лечение антимикробными препаратами предрасполагает к развитию энтерококковых инфекций. Антибиотик-индуцированный усиленный рост Е. faecalis при соответствующих условиях (например, мукозит, энтеропатия) может привести к проникновению микроорганизма в кровь, что часто проявляется лихорадкой неясной этиологии. Механизм этот до конца не изучен.

Первый активный защитный барьер хозяина представляют различные типы клеток и гуморальных факторов иммунной системы, которые атакуют проникающие микроорганизмы. Фагоциты поглощают и лизируют патогенные микроорганизмы, очищая организм от них. Фагоцитированные микробные клетки оказываются внутри вакуоли (фагосомы), которая сливается с лизосомами и образует фаголизосому, внутри которой микробы подвергаются воздействию бактерицидных механизмов, зависящих и не зависящих от кислорода. В фаголизосоме образуются токсичные формы кислорода (супероксид-анион, пероксид водорода, синглетный кислород и гидроксил-радикал), которые вместе с другими антимикробными соединениями и оксидами азота вызывают гибель микроорганизмов.

Некоторые микробы способны избегать действия бактерицидных механизмов. Одно из предположений состоит в том, что фагоцитированные, но не лизированные тканевыми макрофагами энтерококки проникают через стенку кишки в лимфатическую систему, что приводит к системному распространению этого возбудителя.

E. faecalis отличаемся от Е. faecium мощной продукцией супероксид-аниона. Установлено, что основная часть штаммов Е. faecalis образует супероксид-анион, тогда как среди рода E. faecium такие штаммы встречаются менее часто. Покапано, что штаммы Е. faecalis, выделенные из крови больных, вырабатывают супероксид-анион на 60% больше, чем штаммы, выделенные из фекалий. Пока остается неясным, какую роль играет способность вырабатывать супероксид-анион в патогенезе энтерококковых инфекций. Возможно, штаммы энтерококков, отличающиеся мощной продукцией супероксид-аниона, способны лучше использовать среду своего обитания, лучше физиологически адаптированы к утилизации ограниченных ресурсов кишечника в условиях огромной конкуренции, что ведет к усилению их роста.

Готовность колонизировать слизистые оболочки хозяина, уже заселенные другими микробными сообществами, считают одной из загадок нозокомиальных энтерококковых инфекций. В связи с этим можно считать вполне обоснованным мнение, что активное применение цефалоспоринов III поколения — важный фактор риска колонизации и развития, энтерококковой инфекции в условиях стационара. Эти инфекции часто обусловлены полирезистентными штаммами энтерококков экзогенного происхождения, которые вынуждены конкурировать с эндогенными энтерококками за места обитания в организме хозяина. Показано, что госпитальные штаммы могут вырабатывать поверхностный белок новой структуры, который был обнаружен у 40% штаммов при эндокардитах, у 29% штаммов при бактериемии и у 3% штаммов, выделенных из фекалий. Функция этого белка в биологии Е. faecalis пока неизвестна, по не исключено его значение для колонизации экзогенных штаммов энтерококков.

В 10-20% случаев энтерококки выделяются из биоматериалов, исследуемых по поводу интраабдоминальных абсцессов, причем считается, что энтерококки способствуют развитию абсцессов, как правило, только в сочетании с анаэробными микроорганизмами (например, Fusobacierium varium, Bacteroides fragilis). Такая особенность обязательно должна учитываться при выборе антимикробной терапии интраабдоминальных абсцессов.
Энтерококки составляют 8-14% послеоперационных раневых нозокомиальных инфекций (НКИ).

61-93-230. Андрофлор (соскоб из уретры)

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.21.036.001.11 «Андрофлор: определение ДНК возбудителей инфекций, передаваемых половым путем в отделяемом из уретры методом ПЦР»

Биоматериал: Соскоб из уретры

Срок выполнения (в лаборатории): 5 р.д. *

Описание

Оценка микрофлоры урогенитального тракта у мужчин играет важную роль в диагностике репродуктивной функции. Исследование «Андрофлор» предназначено для установления этиологии инфекционно–воспалительных процессов мочеполового тракта мужчин, которое основано на проведении ПЦР в реальном времени. Исследование дает возможность определить микроорганизмы, которые невозможно выявить при бактериологических посевах. Комплекс «Андрофлор» предназначен для диагностики и мониторинга эффективности лечения любых инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы у мужчин, выявления ДНК патогенных микроорганизмов, количественной оценки грибов рода Candida, урогенитальной нормобиоты, широкого условно-патогенной микрофлоры с целью этиологической диагностики. Анализ берется из предполагаемых мест локализации инфекций.

Читайте также:  Прием лекарств при беременности - Гинекология и акушерство - Справочник MSD Профессиональная версия

В состав исследования входят:

Геномная ДНК человека / Общая бактериальная масса / Lactobacillus spp. / Staphylococcus spp. / Streptococcus spp. / Corynebacterium spp. / Gardnerella vaginalis / Atopobium cluster / Megasphaera spp.+Veilonella spp.+Dialister spp. / Sneathia spp.+Leptotrihia spp.+Fusobacterium spp / Ureaplasma urealyticum / Ureaplasma parvum / Mycoplasma hominis / Bacteroides spp.+Porphyromonas spp.+Prevotella spp. / Anaerococcus spp. / Peptostreptococcus spp.+Parvimonas spp., Eubacterium spp. / Pseudomonas aeruginosa+Ralstonia spp.+Burkholderia spp. / Heamophilus spp / Enterobacteriaceae spp.+Enterococcus spp. / Candida spp. / Mycoplasma genitalium / Trichomonas vaginalis / Neisseria gonorrhoeae / Chlamydia trachomatis *КВМ — Контроль взятия материала

Показания к назначению

  • этиологическая диагностика уретрита, баланопостита;
  • мониторинг терапии уретрита, баланопостита; симптомы воспалительных заболеваний урогенитального тракта.

Подготовка к исследованию

Перед взятием биоматериала рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение двух часов. При наличии обильных уретральных выделений клинический образец получают через 15-20 минут после мочеиспускания. Не рекомендуется сдавать биоматериал ранее, чем через 2 недели после применения лекарственных препаратов (антибиотики, пробиотики, эубиотики). Воздержаться от половых контактов в течение 3-хдней до исследования.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

За интерпретацией результатов исследования необходимо обратиться к врачу. Индивидуальный бланк ответа и первичная трактовка результата проводится в лаборатории автоматически. Результаты исследований выдаются в табличной форме и в виде гистограммы.

Геномная ДНК человека (ГДЧ) оценивается в абсолютных значениях, служит для подтверждения наличия в пробирке человеческого биоматериала. Минимальное пороговое значение 10/3.

Общая бактериальная масса (ОБМ) – бактериальная обсемененность биотопа – абсолютный показатель количества бактерий, с которым сравнивают все определяемые бактерий/группы бактерий, минимальное пороговое значение – 10/4.

В случае, если в образце биоматериала одновременно ОБМ и ГДЧ ниже пороговых значений, анализ микрофлоры не проводится. В этом случае рекомендуется повторить взятие биоматериала.

Транзиторная микрофлора: Lactobacillus spp. Относительный показатель, служит маркером наличия в половых путях транзиторной микрофлоры, попадающей в половые пути от половой партнерши. При диагностике острых заболеваний нижних отделов МПС может служить косвенным маркером того, что причиной заболевания является транзиторная микрофлора. Пороговое значение – 10% от ОБМ. При повышении порогового значения Lactobacillus spp. Количественно-качественная оценка микрофлоры не проводится и заключение не выдается. В этом случае требуется повторное взятие биоматериала при условии отсутствия незащищенных половых контактов в течение трех дней.

Нормофлора: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp. Сумма количества микроорганизмов нормофлоры – относительный показатель, снижение которого трактуется как дисбиоз. Низкая общая бактериальная масса (ОБМ 10/3) трактуется как НОРМОЦЕНОЗ. Если нормофлора составляет большую часть ОБМ, а относительное количество УПМ ниже пороговых значений, структура микробиома оценивается как НОРМОЦЕНОЗ.

Условно-патогенные микроорганизмы (УМП). Показатель оценивается в относительных значениях. Относительное количество УМП и/или группы УМП выше пороговых значений свидетельствует об их участии в развитии дисбиоза.

Дрожжеподобные грибы: Candida spp. Показатель оценивается в абсолютных значениях, клинически значимое пороговое значение – 10/4.

Патогены: Mycoplasma genitalium, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis. Качественный показатель, оценивается наличие или отсутствие микроорганизма.

Образец бланка с результатами:

Для исключения ложноотрицательных результатов исследования предусмотрен контроль взятия материала (количество эпителиальных клеток), так как количественный результат микрофлоры рассчитывается на содержание клеток эпителия пациента в образце). Поэтому результат лабораторного исследования полностью зависит от врача уролога, проводящего забор материала. Интерпретации подлежат только результаты со значением контроля взятия материала (КВМ) более 10^4. При КВМ менее 10^4 необходимо повторное взятие материала врачом-клиницистом.

1. Непосредственно перед взятием материала наружное отверстие уретры обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.

2. При наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 мин после мочеиспускания.

3. При отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия материала. Ввести зонд на глубину 3-4 см, собрать материал осторожными вращательными движениями.

4. Погрузить зонд в пробирку с 0,5-1,0 мл физиологического раствора, несколько раз вращать и, отжав остатки раствора о стенки, удалить из пробирки. Пробирку плотно закрыть и промаркировать. Оставлять наконечник зонда в пробирке не рекомендуется!

Определение чувствительности Enterococcus spp.

Энтерококки характеризуются природной устойчивостью ко многим АБП (цефалоспоринам, аминогликозидам), а клиническое значение наблюдаемой in vitro чувствительности к тетрациклинам, хлорамфениколу, макролидам и рифампицину окончательно не определено. Таким образом, перечень препаратов, подлежащих включению в исследование энтерококков, весьма ограничен.

Читайте также:  Психопатии – признаки, диагностика, виды и методы лечения расстройств личности

Таблица 15.

При решении вопроса о необходимости определения чувствительности Enterococcus spp. к АБП крайне важно оценить клиническую значимость этих микроорганизмов. Так, энтерококки, выделенные из нестерильных локусов организма, особенно в составе ассоциаций, чаще всего следует рассматривать как контаминирующие или колонизирующие микроорганизмы, соответственно, определять чувствительность таких штаммов к АБП нецелесообразно. Проводить определение чувствительности необходимо для штаммов Enterococcus spp., выделенных из крови и других в норме стерильных жидкостей и тканей организма, а также из мочи. При этом подходы к определению чувствительности этих микроорганизмов и наборы АБП для тестирования несколько различаются в зависимости от источника выделения штаммов (таблица 15).

Пенициллин и ампициллин

Данные антибиотики являются препаратами выбора для лечения энтерококковых инфекций. Между пенициллином и ампициллином отмечается перекрестная резистентность. Полученные результаты можно экстраполировать на ингибиторо-защищенные аминопенициллины и уреидопенициллины. Поскольку известны случаи резистентности энтерококков к пенициллинам, связанные с продукцией бета-лактамаз, резистентные штаммы следует исследовать на продукцию пенициллиназы в тесте с нитроцефином.

Аминогликозиды

Несмотря на то, что энтерококки обладают природной устойчивостью к аминогликозидам, данный класс АБП широко применяется в комбинированной терапии генерализованных энтерококковых инфекций. Целесообразность таких схем лечения объясняется выраженным синергизмом между аминогликозидами и ампициллином или ванкомицином. Однако синергизм проявляется только в том случае, если МПК аминогликозидов не превосходит 500 мкг/мл для гентамицина и 1000 мкг/мл для стрептомицина. Указанное обстоятельство требует проведения скрининга (методом серийных разведений или ДДМ) на наличие у энтерококков высокого уровня резистентности к стрептомицину и гентамицину.

Ванкомицин

Ванкомицин является препаратом выбора для лечения инфекций, вызванных штаммами, резистентными к бета-лактамам и аминогликозидам. В ряде географических регионов устойчивость энтерококков к ванкомицину является серьезной клинической проблемой. Имеются сообщения о выделении единичных штаммов ванкомицинорезистентных энтерококков и в России. Для выявления устойчивости энтерококков к ванкомицину целесообразно проводить целенаправленный скрининг.

Линезолид

Препарат является средством выбора для лечения инфекций штаммами, устойчивыми к ванкомицину. Линезолид также рассматривается в качестве альтернативы ванкомицину при лечении инфекций, вызываемых штаммами, устойчивыми к бета-лактамам и аминогликозидам.

Другие препараты

В отношении ванкомицинрезистентных энтеркокков, несмотря на отсутствие убедительных данных, возможно оценивать активность тетрациклинов, хлорамфеникола, эритромицина и рифампина.

Для штаммов энтерококков, выделенных при инфекциях мочевыводящих путей, целесообразно исследовать чувствительность к следующим антибиотикам:

  • пенициллину или ампициллину;
  • фторхинолонам;
  • тетрациклинам;
  • нитрофуранам;
  • фосфомицину.

Критерии интерпретации результатов определения чувствительности Enterococcus spp. (пограничные значения диаметров зон подавления роста и МПК АБП) приведены в таблице 16.

Таблица 16.

Скрининг для выявления высокого уровня резистентности к аминогликозидам у энтерококков

Скрининг можно проводить в агаре или бульоне.

Питательная среда

Агар или бульон на сердечно-мозговом экстракте. Питательная среда готовится в соответствии с инструкцией производителя. После автоклавирования и охлаждения до 45 — 50 °С в среду асептически добавляют растворы антибиотиков до следующих конечных концентраций:

  • гентамицин для скрининга в агаре и бульоне — 500 мг/л;
  • стрептомицин: для скрининга в агаре — 2000 мг/л, для скрининга в бульоне — 1000 мг/л.

Приготовление микробной взвеси, инокуляция и инкубация

Микробную взвесь готовят путем суспендирования изолированных колоний из 24-часовой культуры, выращенной на неселективных средах до концентрации 0,5 по Мак-Фарланду. Для скрининга на агаре на поверхность среды наносят 10,0 мкл суспензии. Для скрининга в бульоне в среду вносят инокулюм до конечной концентрации 5 х 10 5 КОЕ/мл. Инкубацию проводят при температуре 35 °С, для гентамицина — в течение полных 24 ч, для стрептомицина — до 48 ч.

Учет результатов

Исследуемый штамм рассматривается как резистентный при следующих условиях:

  • при скрининге на агаре — рост более 1 колонии;
  • при скрининге в бульоне — любой видимый рост.

Контроль качества

  • E.faecalis ATCC 29212 — чувствительный.
  • E.faecalis ATCC 51299 — резистентный.

Скрининг для выявления ванкомицинорезистентности у энтерококков

Скрининг осуществляется на агаре.

Питательная среда

Агар на сердечно-мозговом экстракте. Питательная среда готовится в соответствии с инструкцией производителя. После автоклавирования и охлаждения до 45 — 50 °С в среду асептически добавляют раствор ванкомицина до конечной концентрации 6,0 мг/л.

Приготовление микробной взвеси, инокуляция и инкубация

Микробную взвесь готовят путем суспендирования изолированных колоний из 24-часовой культуры, выращенной на неселективных средах до концентрации 0,5 по Мак-Фарланду. Для скрининга на поверхность агара наносят 10,0 мкл суспензии. Инкубацию проводят при температуре 35 °С в течение полных 24 ч.

Учет результатов

Исследуемый штамм рассматривается как резистентный при росте более 1 колонии на агаре с ванкомицином.

Ссылка на основную публикацию
Эндометриоз симптомы, теории возникновения, диагноз, лечение, познавание Kлиника Элите
Эндометриоз кишечника и его лечение Эндометриоз кишечника – состояние, при котором в стенке кишки выявляются клетки, схожие с клетками слизистой...
Электросон польза и вред 1
Для чего назначают электросон и что это за процедура Одной из разновидностей физиопроцедур является электросон. Что это и каков принцип...
Электростимуляция простаты трансректальная (1 сеанс) — Центральная клиника района Бибирево
Массажёр простаты Elite Electro Stim Массажёр простаты Elite Electro Stim Anal Fantasy Elite Electro Stim Prostate Vibe – это аппарат...
Эндометриоидная киста яичника — причины возникновения, методы лечения, симптомы
3 ведущих симптома и 2 способа лечения эндометриоидной кисты яичника Эндометриоидная киста яичника относится к таким объёмным образованиям, которые вызывают...
Adblock detector